了解eGFP mRNA的基础知识

   日期:2024-11-02     来源:本站    作者:admin    浏览:109    
核心提示:      Vernal提供了一份eGFP mRNA目录,该目录针对增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的高表达进行了优化。eGFP最初从维多利亚Aequo

  

  

  Vernal提供了一份eGFP mRNA目录,该目录针对增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的高表达进行了优化。eGFP最初从维多利亚Aequorea水母中分离出来,是一种广泛用于监测蛋白质定位的报告分子。

  eGFP是一个密码子优化的mRNA序列,编码来自Aequorea victoria的增强型绿色荧光蛋白(eGFP)。EGFP是一种非常明亮的绿色荧光蛋白,在紫外光激发下,其最大发射峰位于509 nm。这使得它成为直接检测的理想候选者,因为它在紫外线下很容易在哺乳动物细胞中可见。

  EGFP具有传统的b桶结构,DSSP二级结构分析表明,该蛋白47%为螺旋结构。具体来说,包含发色团的核心螺旋被建模为310和构象的混合物。

  eGFP mRNA序列是许多实验中必不可少的工具,它通常被用作识别表达特定结构的细胞的标记基因。

  eGFP基因编码增强型绿色荧光蛋白(eGFP),该蛋白与gtp环AMP复合物结合,在蓝光或紫外光照射下发出明亮的绿色荧光。这种蛋白质通常被用作细胞和分子生物学研究中的报告基因,使研究人员能够直接看到细胞内各种基因或蛋白质的活性。

  EGFP是生命科学研究中最著名的“报告者”之一,已被用于监测融合蛋白在活细胞中的定位,使研究人员能够观察特定启动子或通路的功能。例如,使用EGFP和自噬相关蛋白baafa1的细胞试验已被用于评估该蛋白阻止自噬体与溶酶体融合的能力。

  虽然已经开发了许多更新和更先进的荧光蛋白变体,但由于其广泛的可用性和相对较低的成本,EGFP仍然是大多数应用的主力。这可能部分归因于这些较新的荧光蛋白需要大量纯化才能获得高水平的稳定性和亮度。这一过程在许多实验室中只是有时可行。

  这些新荧光蛋白的一个共同问题是,特定的变异倾向于寡聚化并产生过量的昏暗光。这是一个问题,因为微弱的光会导致较低的亮度,这可能会限制显微镜检测到的信号量。然而,研究人员已经能够通过在融合蛋白设计中加入减少寡聚化发生的突变来缓解这一问题。

  绿色荧光蛋白(GFP)是一种应用广泛的蛋白质定位标记。它最初是从维多利亚Aequorea水母中分离出来的,现在是在哺乳动物细胞中直接检测最流行的工具之一。绿色荧光蛋白可以标记融合蛋白可视化或作为控制在各种生化实验。它也可以作为报告基因来监测启动子的活性或跟踪细胞增殖和分化。

  eGFP是GFP的增强版,荧光颜色更亮,表达水平更高。它是一种多功能蛋白质,具有多种用途,可以很容易地在培养物上通过紫外线检测到。绿色荧光蛋白通常用抗体或其他蛋白质标记,以使其对生物功能更具特异性。

  绿色荧光蛋白的发色团是由-桶状结构中心的三个氨基酸的氧化和环化形成的。当被紫外光激发时,绿色荧光蛋白发出明亮的绿色荧光。GFP的高亮度使其易于可视化,即使在复杂的细胞结构或低浓度下也是如此。

  EGFP的分子量可以通过SDS-PAGE测定,这需要将蛋白质放在聚丙烯酰胺凝胶上,在洗涤剂(如十二烷基硫酸钠)中运行。蛋白质被分成几个部分,通过将其与已知蛋白质分子量的标准阶梯进行比较来确定分子量。

  绿色荧光蛋白(GFP)是一种在细胞中表达的蛋白质,当受到紫外光的激发时,会产生明亮的绿色荧光。它最初是从维多利亚Aequorea水母中分离出来的,并在许多应用中用作细胞的荧光标记。

  它通常与其他荧光蛋白配对构建生物传感器,例如,与EGFP配对的生物传感器,并用于检测血糖水平或可视化mRNA表达。在其他应用中,可以将单个基因引入细胞,在所有细胞或特定细胞区域表达eGFP,这对特定功能至关重要。eGFP也常用来确定转染实验是否成功,方法是用紫外线照射细胞培养物,寻找典型的亮绿色辉光。

  对电子密度图的检查已经确定了这两种构象之间不同的残基。差异最明显的是氨基酸Leu18的侧链,它在两个构象之间移动,在发色团的位置和占用上有显著差异。

 
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